ПЛР кількісний: навіщо і як проводиться.

ДНК ПЛР аналізи направлені на виявлення патогенних мікроорганізмів. Вони бувають кількісні і якісні.
Якщо при ПЛР ДНК виявлена або не визначена, це якісний тест.
Якщо вказується ще й концентрація, це кількісна ПЛР. Даний аналіз більш інформативний. Хоча потрібно він далеко не завжди.
статті

Коли необхідний кількісний ПЛР аналіз

При ПЛР кількісне визначення потрібно в багатьох випадках. Вона дає додаткові можливості, якщо порівнювати з якісним аналізом.
Якщо після проведення ПЛР ДНК виявлено, знати кількість мікроорганізмів необхідно, щоб зрозуміти:

• потрібно пацієнту лікування (при низьких кількісних показниках воно може не призначатися);
• наскільки швидко йде одужання (чи є вірусологічна відповідь від лікування);
• чи варто продовжувати терапію цими ж препаратами або потрібно міняти схему;
• хвороба знаходиться під контролем або виникає рецидив, що вимагає додаткових терапевтичних заходів;
• наскільки високим є ризик ускладнень (наприклад, ймовірність диспластичних змін в шийці матки при папіломавірусної інфекції).

Поговоримо докладніше, за яких патологіях можуть знадобитися кількісні ДНК ПЛР аналізи.

ПЛР на мікоплазми, уреаплазми, гарднерели, кандиду

Існують мікроорганізми, які не завжди викликають патологічний процес в структурах урогенітального тракту. Вони можуть викликати запальні або інші симптоми тільки в тому випадку, коли популяція бактерій значно збільшиться.
Щоб дізнатися, збільшилася вона чи ні, потрібні відповідні аналізи. Багато лабораторій пропонують комплексний кількісний аналіз ПЦР відразу на кілька збудників.
Мікоплазми двох видів можуть викликати запальні процеси в піхві. Це мікоплазма геніталіум і хомініс. Причому, геніталіум може викликати запалення навіть в мінімальних концентраціях. Цей мікроорганізм розглядається як однозначно патогенний.В При його виявленні навіть в малих кількостях проводиться лікування. Метою його вважається ерадикація збудника. Критерієм успішності терапії є негативний аналіз ПЦР на мікоплазму геніталіум.
А ось хомініс — менш небезпечний вид даних мікроорганізмів. Він може виявлятися в урогенітальному тракті багатьох людей.
В тому числі тих, хто не має ознак запального процесу в урогенітальному тракті. В цьому випадку порогової вважається концентрація бактерій в клінічному матеріалі від 10 ⁴ копій ДНК в мл.
Якщо ПЛР покаже, що бактерій менше, лікування може і не призначатися. Але якщо кількість патогенів перевищує вказане значення, потрібно антибактеріальна терапія.
Тому що в великих кількостях мікоплазми:

• викликають запалення;
• можуть провокувати ускладнення;
• передаються при статевому акті;
• небезпечні для вагітних.

Гарднерели — вид транзитних мікроорганізмів, які часто виявляються в урогенітальному тракті жінок. Вони не викликають запалення. Але у великих кількостях провокують дисбактеріоз. Це захворювання, основним проявом якого є рясне виділення з піхви з неприємним запахом.
Патологія порушує якість статевого життя. Гарднерели в великих кількостях здатні швидко знищувати лактобактерій. Вони витісняють їх. В результаті може виявитися так, що лактобактерії взагалі не виявляються в піхву. Цього не повинно статися, тому що молочнокислі бактерії захищають організм жінки від інших мікробів. Вони роблять це за рахунок продукції молочної кислоти.
Кисла рН піхви не дає умовно-патогенних бактерій надмірно розвиватися.
Кількісна ПЛР ДНК діагностика на гарднерели показує, скільки цих мікроорганізмів міститься в піхву. Якщо їх більше 10 ⁴ копій ДНК в мл, потрібно антибактеріальне лікування. Воно дозволяє запобігти дисбактеріоз піхви або усунути його основні прояви, якщо вони вже присутні.
Кандиди — ще одна група мікроорганізмів, для яких має значення кількість. Це гриби, які в нормі присутні в урогенітальному тракті більшості людей.
Кандидоз є опортуністичної інфекцією. Він розвивається, коли в організмі ослаблений імунітет. У цьому випадку кількість кандид різко збільшується. З’являються червоні плями, білі виділення і інші симптоми, іноді досить сильно виражені.
Саме по собі виявлення кандиди за допомогою ПЛР не дає лікаря ніякої цінної інформації. Всім і так зрозуміло, що ці гриби в структурах урогенітального тракту є. Тому якісна ПЛР на кандидоз не проводиться.
Клінічне значення має тільки кількісний метод ПЛР. При визначенні кандид в кількості, що перевищує порогове значення, встановлюється діагноз кандидоз. Призначається відповідне лікування.
Показанням для призначення кількісного ПЛР на кандиди є в основному наявність симптомів кандидозу. Аналіз також може бути використаний у разі виявлення псевдомицелия при мікроскопії мазка з урогенітального тракту. ПЛР дозволяє встановити вид гриба.
Адже кандидоз може бути викликаний десятками видів мікроорганізмів. Найчастіше це кандида альбіканс. Але є ще 5-6 видів грибів, які провокують кандидоз досить часто. Причому, їх наявність ускладнює процес лікування.
Часто такі кандидози рецидивують. Вони погано реагують на які традиційно використовуються при кандидозі протигрибкові препарати.
Кількісна ПЛР на кандидоз використовується і після лікування. Вона допомагає лікареві зрозуміти, чи була проведена терапія успішною, і оцінити ризик рецидиву грибкового захворювання в майбутньому.
Кількісна ПЛР на уреаплазмоз теж проводиться досить часто. Уреаплазми розглядаються як умовно-патогенна флора. Тобто, вони небезпечні тільки в великих кількостях.
ПЛР кількісна на уреаплазми дозволяє вирішити питання про необхідність лікування.
У багатьох лікарів-венерологів доцільність використання кількісної ПЛР на уреаплазми викликає питання. Цей мікроорганізм має дуже високу адгезивної здатністю. Він міцно прилипає до клітин, тому в клінічному матеріалі може бути набагато менше бактерій, ніж є в організмі.
Відповідно, кількісні показники можуть бути заниженими. Крім того, вони значно варіюють від аналізу до аналізу.
Хоча в даний час вважається, що лікування варто починати тільки при концентрації бактерій від 10 ⁴ копій ДНК в мл, нерідко лікарі призначають лікування і при меншому їх кількості. Особливо якщо жінка готується до вагітності.
Є чимало досліджень, які підтверджують: уреаплазма дуже небезпечна для плоду. Вона викликає інфікування навколоплідних оболонок.
Уреаплазма здатна спровокувати передчасні пологи. Вона викликає респіраторні інфекції у новонародженого плоду. Тому навіть якщо якісна ПЛР показує невеликі кількості уреаплазм, бажано пролікуватися тим жінкам, які готуються до вагітності.
Не потрібно лікування при поєднанні таких факторів:

• концентрація уреаплазм нижче порогової;
• немає симптомів запалення;
• подружня пара не планує вагітність.

Тоді лікуватися не обов’язково. Але такі випадки зустрічаються рідко. Тому що пацієнти рідко приходять на діагностику венеричних захворювань з профілактичною метою. В основному вони звертаються після виникнення запальних симптомів.

Мазок ПЦР кількісний на хламідії

На хламідії частіше проводять тест якісний, а не кількісний.
Тому що цей мікроорганізм є патогенним.
Одного лише факту його виявлення досить, щоб почати лікування.
Причому, кількість копій ДНК не відіграє суттєвої ролі у визначенні схеми терапії і дозувань препаратів.
Проте, кількісні тести іноді проводять.
Вони дають лікареві можливість оцінити прогноз захворювання.
Зрозуміти, наскільки висока ймовірність ускладнень.
А також спрогнозувати відповідь на лікування.
При великій концентрації хламідій в урогенітальному тракті доктор може збільшити курс терапії.
Оцінюючи цей показник в динаміці, він може зрозуміти, чи працюють ті антибактеріальні препарати, які він призначив.

Кількісний ПЛР аналіз ВПЛ 21 тип

Такі дослідження можуть використовуватися в діагностиці папіломавірусної інфекції.
Чому потрібні саме кількісні аналізи, а не якісні? Вони більш інформативні в плані оцінки прогнозу захворювання, доцільності противірусного лікування і оцінки його результативності.
Для первинної діагностики зазвичай проводять якісну ПЛР. Вона допомагає встановити, які типи ВПЛ присутні в організмі. Це можуть бути високоонкогенні, среднеонкогенние або низькоонкогенні типи.
Особливу настороженість викликають віруси високою онкогенности.
Тому не зайвим буде знати, в якій кількості вони містяться в урогенітальному тракті.
Особливо важливий цей аналіз для жінок. Адже у них ВПЛ є основною причиною раку шийки матки.
У свою чергу карцинома шийки матки — найчастіше злоякісне онкологічне захворювання серед молодих жінок.
Проведення кількісної ПЛР дозволяє встановити, прогресує чи регресує патологічний процес. Якщо кількість вірусів збільшується, це говорить про високий ризик дисплазії шийки матки. А вона в подальшому переходить в рак.
При тривало зберігаються високим вірусним навантаженням показано лікування за допомогою імуномодуляторів і противірусних препаратів загальної дії. В процесі лікування проводяться повторні дослідження ПЛР.
Лікар дивиться, стало вірусів в організмі більше або менше. Якщо їх стало менше, це хороший прогностична ознака. Якщо ж вірусів стало більше, то за результатами кількісної ПЛР схему терапії варто переглянути.

Кількісне визначення РНК ВІЛ і необхідність для лікування

Кількісна ПЛР має найважливіше значення в діагностиці і терапії ВІЛ.
В основному первинна діагностика захворювання проводиться шляхом визначення рівня антитіл в крові. Це метод набагато дешевше, а результати можна отримати швидше.
Але в деяких випадках без ПЛР не обійтися. Метод дозволяє виявити ДНК провируса або РНК вірусу в крові.
В основному використовують кількісну ПЛР для виявлення РНК. Це найбільш ранній маркер ВІЧ.В Аналіз крові дозволить діагностувати хворобу вже через кілька тижнів після зараження.
А кількісна оцінка методом ПЛР має величезне значення у визначенні схеми терапії.
За допомогою аналізу оцінюють ефективність лікування. Якщо вірусне навантаження знижується до невизначуваним, це говорить про те, що терапія проходить успішно.
Антиретровірусні препарати працюють. Але якщо вона починає зростати, це свідчить про формування резистентності до препаратів. Подібне нерідко відбувається через кілька років після початку лікування.
В такому випадку схему лікування доводиться міняти. Інакше кількість імунних клітин в крові почне знижуватися. Внаслідок погіршення імунітету почнуть приєднуватися інфекції і виникати злоякісні новоутворення.
Використовується також виявлення ДНК ВІЛ за допомогою ПЛР. Метод більш кращий для обстеження новонароджених дітей. Тому що кількість РНК в крові може зменшуватися, якщо мати отримувала антиретровірусну терапію. В результаті в перші дні життя ПЛР кількісна на РНК вірусу може бути помилково негативні.

Оцінка результативності лікування за допомогою ПЛР аналізу крові до гепатитів

Кількісний аналіз ПЦР використовується при гепатиті C для визначення рівня віремії.
Метод дає можливість підібрати оптимальну схему терапії. А також він дає можливість оцінити, наскільки ефективною є проведена терапія.
Завдяки ПЛР вірус гепатиту С визначається вже через 1 тиждень з моменту зараження. Надалі метод застосовується, щоб зрозуміти, чи було специфічне лікування ефективним.
Результати оцінюються по ряду критеріїв:

• вірусологічний;
• біохімічний;
• морфологічний.

Вірусологічний контроль проводиться за допомогою ПЛР.
Якщо РНК вірусу гепатиту С не виявляється, то терапія пройшла успішно.
Якщо результати залишаються негативними протягом 6 місяців, такий вірусологічну відповідь вважається стійким.
Поява РНК вірусу на тлі припинення лікування каже про рецидив захворювання. В процесі проведення терапії за допомогою кількісного ПЛР оцінюють динаміку зміни концентрації вірусу.
Оптимальним результатом вважається зникнення РНК протягом не більше ніж 4 тижнів противірусного лікування. Такий вірусологічну відповідь називають раннім.
ПЛР також дозволяє визначити тип вірусу гепатиту. При різних типах призначаються різні схеми лікування. Кількісні показники при вірусному гепатиті С оцінюють через кожні 3 місяці терапії.

Інтерпретація кількісної ПЛР мазків і крові

Інтерпретацією результатів займається лікар.
Одиницею вимірювання кількості патогенних мікроорганізмів є концентрація ДНК або РНК в одному мілілітрі клінічного матеріалу. Вона зазвичай позначається в 10 яка зведена в ступінь. Цей ступінь фактично означає кількість нулів, які слідують після одиниці. Наприклад, 10 ⁴ — це 10В 000 копій ДНК.
Для різних інфекцій норми відрізняються. У кожному разі потрібна індивідуальна розшифровка аналізу, так як часто їх ще потрібно порівнювати з проведеними раніше дослідженнями.

Підготовка до кількісного аналізу ПЛР мазків і крові

Підготовки до здачі крові не потрібно.
А ось до здачі мазка потрібно приготуватися. Є кілька обмежень, яких слід дотримуватися.
Заборонено напередодні здачі аналізу:

• вести інтимне життя — протягом 2 днів;
• приймати антибактеріальні препарати (за винятком випадків, коли вони призначені лікарем) — протягом 2 тижнів;
• утриматися від сечовипускання — 3 години;
• жінкам -»не спринцюватися і не користуватися тампонами — 2 дні.

У

До якого лікаря звернутися для ПЛР аналізу

Щоб зробити якісну ПЛР, зверніться до лікаря-венеролога. Фахівці даного профілю ведуть прийом в нашому медичному центрі. Вони оцінять, чи є у вас показання до призначення даного аналізу.
При необхідності ви зможете здати кров або мазки в день звернення. Результати для більшості досліджень отримаєте на наступний день.
Для здачі аналізів методом ПЛР звертайтеся до автора цієї статті — венерологув Києві з багаторічним досвідом роботи.